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當(dāng)前位置:首頁   >  產(chǎn)品中心  >  試劑盒  >  檢測試劑盒  >  TE0513吲哚乙酸氧化酶檢測試劑盒(IAA比色法)

吲哚乙酸氧化酶檢測試劑盒(IAA比色法)

簡要描述:吲哚乙酸氧化酶檢測試劑盒(IAA比色法),雅吉生物是一家生物企業(yè)主營ATCC細(xì)胞,細(xì)胞系,原代細(xì)胞和培養(yǎng)試劑,重組蛋白,ELISA試劑盒、抗體、熒光定量PCR檢測試劑盒

  • 產(chǎn)品型號:TE0513
  • 廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
  • 更新時間:2024-11-01
  • 訪  問  量:463

詳細(xì)介紹

植物體內(nèi)生長素的種類很多,其中吲哚乙酸(IAA)是植物體內(nèi)普遍存在的一種生長素,植物體內(nèi)IAA的含量,對于植物的生長、

發(fā)育、衰老、脫落等均有重要意義。植物體內(nèi)存在吲哚乙酸氧化酶(Indoleacetic acid oxida-se),該酶是植物體內(nèi)一種氧化分

解吲哚乙酸的酶,吲哚乙酸氧化酶能夠氧化IAA使其失去活性,從而調(diào)節(jié)體內(nèi)IAA的水平,影響植物的生長。


吲哚乙酸氧化酶檢測試劑盒(IAA比色法)檢測原理是吲哚乙酸在吲哚乙酸氧化酶作用下形成吲哚醛,使體系中吲哚乙酸

含量減少,剩余的吲哚乙酸在無機(jī)酸存在下與FeCl3作用生成紅色螯合物,吲哚乙酸氧化酶活性的大小可以用其破壞吲哚乙酸的

速度表示,通過比色法(酶標(biāo)儀)測定530nm處吸光度,根據(jù)對照與待測樣品中吲哚乙酸含量的差值,計算出吲哚乙酸氧化酶活性

水平,主要用于檢測植物樣本、血清等中吲哚乙酸氧化酶活性,尤其適用于定量測定植物樣本吲哚乙酸氧化酶活性。

該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域,不適用于臨床診斷或其他用途。


操作步驟(僅供參考)

自備材料:

1、蒸餾水

2、電子天平、研缽或勻漿器、離心管或試管

3、低溫離心機(jī)、恒溫箱或水浴鍋、酶標(biāo)儀、酶標(biāo)板


操作步驟(僅供參考):

1、準(zhǔn)備樣品∶

①植物樣品︰取1g植物組織或水果中層果肉,加入2.5ml PAL Lysis Buffer,冰浴情況下充分搗碎研磨或勻漿,4℃ 10000r/min

離心15~20min,留取上清液,-20℃凍存,用于苯丙氨解氨酶的檢測。

②血漿、血清和尿液樣品︰血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于該試劑盒的測定,-20℃凍存,用于苯丙解氨的檢測。

③細(xì)胞或組織樣品∶取恰當(dāng)細(xì)胞或組織裂解液,如果有必要需進(jìn)行適當(dāng)勻漿,4℃ 10000r/min離心15~20min,取上清液,

-20℃凍存,用于苯丙酸解氨酶的檢測。④高活性樣品︰如果樣品中含有較高活性的苯丙解氨酶,可以使用蒸餾水或PAL

Lysis Buffer稀釋進(jìn)行恰當(dāng)?shù)南♂尅?/span>

2、PAL加樣∶

取96孔板,按照下表設(shè)置對照孔、測定孔,溶液應(yīng)按照順序依次加入,并

注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的PAL活性過高,可以減少樣品用量或適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測定,樣品的檢測最好能設(shè)置2平行孔,

求平均值。

加入物(μl)對照孔測定孔

蒸餾水150100

待測樣本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL檢測︰

以對照孔為對照(調(diào)零),酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為   A測定0);40℃準(zhǔn)確孵育1h,立即加入10μl PAL終止

液終止反應(yīng)(備選方案),以對照孔為對照調(diào)零,酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定孔的吸光度(記為A測定1)。

注意︰加入PAL終止液終止反應(yīng)為非必須步驟,可37℃準(zhǔn)確孵育1h后直接以對照孔為對照調(diào)零,酶標(biāo)儀立即測定290nm處測定

孔的吸光度。

注意事項∶

1、待測樣品中不能含有酶抑制劑,同時需避免反復(fù)凍融。

2、獲得上清液為PAL酶液,應(yīng)盡快檢測,亦可-20°℃保存。

3、如果沒有可測定紫外區(qū)的酶標(biāo)儀和酶標(biāo)板,也可以使用紫外分光光度計和石英比色皿,但應(yīng)注意比色杯的最小檢測體積。

4、每次檢測指標(biāo)不宜過多,否則操作時間不一,有可能導(dǎo)致樣本間的差異。5、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。




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