TGIRT-III Reverse transcriptase試劑具有依賴于DNA/RNA雜交鏈的反轉(zhuǎn)錄酶活性，其具有的延伸性能，因此更易快速獲得全長的cDNA能快速合成cDNA，該酶具有強的鏈轉(zhuǎn)換活性（Switch）。因此，該酶可用于Template-Switching的RNA-seq，如tRNA、ncRNA、miRNA等核酸分子的同步逆轉(zhuǎn)錄和加接頭（TGIRT template-switching reaction，用于TGIRT-Seq）。除此外，其還可以利用RNA的5’端帽結(jié)構(gòu)進行SMART建庫（SMART-Seq）。該酶的反應(yīng)溫度為37-55°C，最佳反應(yīng)溫度為50°C。

應(yīng)用

非編碼RNA轉(zhuǎn)錄組測序

RIP-seq, HITS-CLIP, irCLIP and CRAC

通過高通量測序鑒定RNA堿基修飾

長cDNA的合成

儲存

長期儲存置于-20°C以下，可保存2年；短期使用置于4°C（3個月）保存。

TGIRT-III Reverse transcriptase試劑恒溫擴增使用策略及實例展示

應(yīng)用實例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物組進行的LAMP測試。Bst4.0 SYBR Green試劑可在標準定量PCR儀或恒溫熒光儀上進行反應(yīng)。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)25min的檢測結(jié)果，可以看到檢測反應(yīng)<20min(達平臺期)。

應(yīng)用實例2： 用 LP1002引物組進行的LAMP測試。OG變色法為終點變色策略，在反應(yīng)結(jié)束后，倒置反應(yīng)管，溶解管蓋上染料后，陽性樣本呈現(xiàn)出醒目的綠色，陰性表現(xiàn)出橙色，區(qū)分明顯。且該方法不受樣本類型限制，雜質(zhì)耐受性很好。以體外轉(zhuǎn)錄RNA為模板，1-6分別為1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC為ddH2O為模板。下圖為65℃反應(yīng)20min后檢測結(jié)果。

應(yīng)用實例3：A3825-01 紅黃變色反應(yīng)（肉眼觀察）

以 體外轉(zhuǎn)錄 RNA 為模板，1-6分別為1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC為ddH2O為模板。 上圖為加樣結(jié)束反應(yīng)起

始前，下圖為 65 度反應(yīng) 30min 后。

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